本文引用：韩远山，蔺晓源，易刚强，王宇红，杨 蕙，孟 盼，赵洪庆，杜 青.复方柴金解郁片对慢性应激抑郁大鼠 HPA 轴及海马单胺神经递质的影响[J].湖南中医药大学学报，2017，37（3）：240-244.

复方柴金解郁片对慢性应激抑郁大鼠HPA 轴及海马单胺神经递质的影响

韩远山 1，蔺晓源 1，易刚强 2*，王宇红 2，杨 蕙 1，孟 盼 2，赵洪庆 2，杜 青 2

（1.湖南中医药大学**附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学，湖南省中药粉体与****省部共建国家重点实验室培育基地，湖南 长沙 410208）

〔摘要〕 目的 研究复方柴金解郁片对慢性应激抑郁模型大鼠 HPA 轴及海马单胺神经递质的影响，探讨其可能的抗抑郁机制。 方法 将 SD 大鼠随机分为 6 组：对照组、模型组、氟西汀组（5.4 mg/kg）、复方柴金解郁片高、中、低剂量组（2.74、1.37、

0.68 g/kg），采用慢性不可预见性温和应激建立抑郁模型，于造模同时给药，连续 28 d。采用蔗糖偏好实验和旷场测试检测大鼠的抑郁样行为，Morris 水迷宫检测大鼠的学习记忆能力，HE 染色观察大鼠海马病理结果变化，ELISA 法检测大鼠血浆促肾上腺皮质**释放**（CRH）、促肾上腺皮质**（ACTH）、皮质酮（CORT），以及海马 5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5- HIAA）、去甲肾上腺素（NA）、多巴胺（DA）的含量。 结果 与抑郁模型组比较，复方柴金解郁片组大鼠蔗糖偏嗜度及活动次数均显著提高，学习记忆能力提升，海马病理损伤情况得到缓解，血浆 CRH、ACTH、CORT 含量下降，海马组织内 5-HT、NA、DA 含量上升，5-HIAA 含量下降（P<0.05）。  结论   复方柴金解郁片能显著改善模型大鼠情绪和学习记忆功能、缓解海马组织损伤，其作用可能与抑制 HPA 轴亢进、增加脑内单胺递质含量有关。

〔关键词〕 复方柴金解郁片；抑郁；慢性应激；HPA 轴；海马；单胺递质

〔中图分类号〕R285.5 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2017.03.003

抑郁症是以情绪低落、兴趣丧失、思维迟缓为主要特征的精神性**，具有高发病、高复发、高**、高医疗成本的特点。 现代医学研究认为，下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA 轴）是机体一个重要的***轴，海马是 HPA 轴负反馈的调节**，同时也是学习、 记忆以及引起情感障碍的关键脑区，HPA 轴失调依赖性的海马神经元损伤是抑郁产生的主 要驱动力[1-2]。 复方柴金解郁片（**授权号为 ZL20 1210126887.X）具有“疏肝**、**解郁”之功效， 临床用于**轻、中度抑郁症，疗效显著。 为了能更好地探明复方柴金解郁片的抗抑郁功效及其机制， 本研究以慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠为研究 对象， 通过研究复方柴金解郁片对模型大鼠行为、HPA 轴指标促肾上腺皮质**释放**（CRH）、促肾上腺皮质**（ACTH）、皮质酮（CORT）以及海马单胺递质 5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、去甲肾上腺素（NA）、多巴胺（DA）的调控作用，探讨其抗抑郁作用的机制。

1 材料与方法

1.1 动物

SPF 级雄性 SD 大鼠 75 只，体质量 160～180 g， 由北京维通利华实验动物有限公司提供， 合格证号：No.11400700028228。许可证号：SCXK(湘) 2012-

0001。 在光/暗周期为 12 h/12 h （光照时间 7：00～

19：00）的条件下饲养于笼中，自由饮水和摄食。

1.2 **

复方柴金解郁片浸膏粉，相当生药量为 6.6 g 生药/g（文中均按生药量计算）(由湖南中医药大学**附属医院药剂科提供，批号为 20121025)。 复方柴金解郁片临床拟用**每日生药量为 20.5 g。 盐酸氟西汀分散片，Patheon France 生产，批号 2860A。

1.3 试剂与主要仪器

    5 -HT、5 -HIAA、NA、DA、ACTH、CRH、CORT  酶联**试剂盒购自美国 R&D 公司；DB001 Morris 水迷宫购自北京智鼠多宝生物科技有限责任公司； MK3 型酶标仪购自美国 Thermo；ET-12P 组织脱水机购自江西富华生物技术有限公司；RM223 切片机购自德国莱卡公司；DVP-W7 显微镜图像处理系统购自南京民城信息系统公司。

1.4 分组与给药

所有大鼠适应性喂养 3 d 后进行蔗糖水消耗测试， 选取蔗糖水摄入量相近的 72 只大鼠随机分为 6 组， 包括正常对照组、抑郁模型组、氟西汀组

（5.4 mg/kg）、 复方柴金解郁片高、 中、 低剂量组(2.74、1.37、0.68 g/kg)。 造模同时灌胃给药， 每日 1 次，连续 28 d，对照组、模型组则给予等体积的蒸馏水。 末次给药结束后，所有大鼠进行行为学检测，检测完成后用水合氯醛将大鼠麻醉，腹主动脉取血，取大鼠下丘脑、垂体、肾上腺等组织固定于 10%甲醛溶液中，冷冻台上取海马组织，液氮速冻，保存待用。

1.5造模

     采用慢性不可预见性温和应激联合孤养建立抑郁大鼠模型[3]，应激方法包括冰水浴 4 min、禁食或禁水 24 h、50 V 电击 3 min、 倾笼 24 h、 噪音

4 h、光照或黑暗 24 h、潮湿垫料 24 h、夹尾 1 min， 每天采用 1~2 种刺激，同种刺激不连续出现，躯体应激每周限 1 次（电击、夹尾），共 28 d，

期间动物均孤笼饲养。

1.6行为学测试

1.6.1 糖水偏嗜度 给药 28 d 后，禁食禁水 24 h， 测定每组动物 4 h 内的 1 %蔗糖水偏嗜度。 蔗糖偏嗜度=蔗糖水消耗量/( 蔗糖水消耗量+ 蒸馏水消耗量)×100%。

1.6.2 旷场实验 将大鼠放入高 40 cm，长宽为 80 cm 的测试敞箱，以大鼠在 3 min 内穿越底面次数为水平得分（四爪均进入方格），以直立次数为竖直得分（两前爪离开底面）。 记录大鼠水平得分和竖直得分的总和。

1.6.3 Morris 水迷宫实验 Morris 水迷宫操作系统：直径为 1.5 m 的圆形水池，平台直径为 0.15 m， 水深 0.4 m，平台置于迷宫西南象限。 水面高出平台3 cm，水温保持(24±1) ℃。 于第 23 天开始对各组大鼠进行水迷宫训练，训练 5 d，训练完成后记录大鼠爬上平台的潜伏期时间， 考查大鼠的学习能力；于第 28 天撤去平台，   记录大鼠进入平台所在象限的潜伏时间，考察大鼠的记忆能。

1.7 HE 染色
  取固定于 4%甲醛溶液中的组织， 常规石蜡包埋，切片，薄片用二甲苯和各级乙醇切片脱蜡水洗， 洗完后用苏木素染色 5 min，蒸馏水冲洗至干净，经盐酸乙醇分化和自来水浸泡后置伊红液中 2 min， 纯酒精脱水，二甲苯使之变透明，用加拿大树胶封固，光学显微镜下观察待检测组织的病理情况。

采用 SPSS 17.0 统计软件进行数据分析， 数据以“x±s”表示， 采用 One-way-ANOVA 检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对抑郁大鼠糖水偏嗜度的影响

给药前（造模前），各组大鼠糖水偏嗜度无明显差异（P＞0.05）。 28 d 造模结束后，与对照组比较，模型组大鼠糖水偏嗜度明显降低（P<0.01）；与模型组比较，氟西汀组、复方柴金解郁片高、中剂量组大鼠糖水偏嗜度明显升高（P<0.01 或 P<0.05），结果见表 1。

2.2 对抑郁大鼠活动次数的影响

     与对照组比较，抑郁模型组大鼠自主活动次数显著下降（P<0.01）。 与模型组比较，氟西汀组和复方柴金解郁片高剂量组大鼠总活动数明显增加 （P<0.01）；同时，中剂量的复方柴金解郁片也能使模型大鼠活动次数增加（P<0.05）。 结果见表 2。

2.3 对抑郁大鼠学习记忆能力的影响

与对照组比较，模型组大鼠出现学习记忆障碍， 表现为爬上平台潜伏期时间和进入目标象限所耗时 间均明显延长（P<0.01）。 在给予氟西汀和高剂量的复方柴金解郁片后， 大鼠学习和记忆能力均有所提升， 表现为找到平台时间与进入目标象限时间均显著降低（P<0.01 或 P<0.05）。 结果见表 2。

2.4 对抑郁大鼠血浆 ACTH、CRH、CORT 含量的影响与对照组比较，  模型组大鼠血浆 ACTH、CRH、CORT 均明显升高(P＜0.01)。   与模型组比较，氟西汀组、复方柴金解郁片高剂量组大鼠 ACTH、CRH、CORT 含量均明显下降 (P＜0.01 或 P＜0.05)；复方柴金解郁片中剂量组大鼠血浆 CORT 含量显著下降 (P＜0.05)。结果见表 3。