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北京智鼠多宝生物科技有限责任公司
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微量注射泵-荔枝核总黄酮对脓毒症大鼠肠损伤的保护作用

荔枝核总黄酮对脓毒症大鼠肠损伤的保护作用

王 璐1 姚 兰1 张 爽2 刘玉兰1 柳 舟1 邹捍东1

( 1  武汉大学人民医院湖北 武汉 430060; 2  湖北科技学院护理学院湖北 咸宁 437000)

摘要 目的 探讨荔枝核总黄酮对脓毒症大鼠肠损伤的保护作用方法 64 只Wistar 大鼠随机分为假手术组脓毒症组荔枝核总黄酮假手术组荔枝核总黄酮组每组 16 只脓毒症组和荔枝核总黄酮组大鼠均采用腹主动脉阻断术联合腹腔注射脂多糖( LPS) 的方法构建严重脓毒症模型; 假手术组和荔枝核总黄酮假手术组仅分离腹主动脉但不夹闭不注射 LPS仅于相应时点腹腔注射等量生理盐水术后第 2 天开始假手术组和脓毒症组给予 0 9% 氯化钠溶液 5 mL / ( kg·d) 灌胃荔枝核总黄酮组及荔枝核总黄酮假手术组均给予荔枝核总黄酮 150 mg / ( kg·d) 灌胃均每天 1 次 7 d各组手术 8 h 后采血检测血清中 C 反应蛋白( CRP) 、白细胞介素 6( IL  6) 、肿瘤坏死因子 α( TNF  α) 水平; 7 d 后取小肠组织检测一氧化氮合酶( NOS) 活力及一氧化氮( NO) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、丙二醛( MDA) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH  Px) 含量结果  荔枝核总黄酮组大鼠生存率明显高于脓毒症组( P  0 05) 但仍低于假手术组( P  0 05) 脓毒症组血清 CRPIL  6TNF  α 水平均明显高于假手术组( P 均  0 05) 荔枝核总黄酮组血清 CRPIL  6TNF   α 水平均明显低于脓毒症组( P 均  0 05) 脓毒症组大鼠肠组织中 NOMDA 含量和 NOS 活力均明显高于假手术组P 均  0 05) SOD 和 GSH  Px 含量均明显低于假手术组( P 均  0 05) ; 荔枝核总黄酮组大鼠肠组织中 NOMDA 含量和 NOS 活力均明显低于脓毒症组( P 均  0 05) SOD 和 GSH  Px 含量均明显高于脓毒症组( P 均  0 05) ; 荔枝核总黄酮假手术组各指标与假手术组比较差异均无统计学意义( P 均  0 05) 结论  荔枝核总黄酮可以增强机体抗氧化能力减轻炎症反应及氧化应激损伤从而达到保护脓毒症肠损伤的目的

关键词 荔枝核总黄酮; 脓毒症; 肠损伤; 炎症反应; 氧化应激

 

脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征ICU 内病死率为 30% 70%1]肠道在脓毒症的发**展中起重要作用甚至是炎症反应的关键器官脓毒症发生时炎性反 应因子增加肠道内环境平衡紊乱肠上皮细胞凋亡增多 道黏膜屏障受到破坏肠黏膜通透性发生改变致使肠道菌群 失调进而引发全身炎症反应危及患者生命2]目前临床 尚未成功开发出有针对性地**脓毒症肠道损伤的有效药研究发现荔枝核黄酮类化合物有抗氧化应激****调理等作用3故本研究应用腹主动脉阻断术联合腹腔注射脂多糖( LPS) 方法构建严重脓毒症大鼠模型探讨了荔枝核总黄酮对脓毒症肠损伤的保护作用及抗氧化机制旨在为 其用于脓毒症肠损伤的**提供实验依据

1 实验资料

1. 1 实验动物  SPF 级雄性 Wistar 大鼠 64 只( 湖北省** 制中心实验动物中心提 : 11400700239487) ,体质量(240 ± 20) g

1. 2   药品试剂及仪器 LPS  Sigma 公司提供;兔抗大鼠肿瘤坏死因子 α( TNF  α) 抗体和兔抗大鼠白细胞介素 6 ( IL  6 ) 抗体由武汉博士德生物有限公司提供; 一氧化氮( NO) 、一氧化氮合酶( NOS) 、丙二醛( MDA) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH  Px) 均由南京建成生物所提供微量注射仪( 北京智鼠多宝生物科技有限责任公司);电子天平( SARTOR2USBP211德国生产) ;8021 离心机 ( 上海手术器械厂);GF  D200 半自动生化分析仪( 山东高密彩虹分析仪器有限公司);723   分光光度仪( 上海精密仪器仪表有限公司)。

1. 3  分组模型制备及处理 按随机数字表将大鼠随机分为假手术组脓毒症组荔枝核总黄酮假手术组荔枝核总黄酮组每组 16 只脓毒症组和荔枝核总黄酮组大鼠均予以 45 mg / kg wu***钠腹腔注射麻醉后取右侧卧位经侧腹切口 腹膜后分离出腹主动脉行腹主动脉阻断再灌注 2 h 腹腔注 LPS 20 mg / kg;假手术组和荔枝核总黄酮假手术组仅分离腹主动脉但不夹闭不注射 LPS仅于相应时点腹腔注射等量生理盐水术后第 2 天开始假手术组和脓毒症组给予9% 氯化钠溶液 5 mL /( kg·d) 灌胃荔枝核总黄酮组及荔枝核总黄酮假手术组均给予荔枝核总黄酮 150 mg /( kg·d) 灌胃均每天 1 次共 7 d第 7 天末各组大鼠全部处死留取肠组织炎症因子检测  各组大鼠分别于造模成功后 8 h 采血 全血 3 000 r / min 离心 15 min 后取血清 80 ℃ 冻存用于检测血清中 C 反应蛋白( CRP) 、IL  6TNF  α 水平

1. 5 抗氧化因子检测  取各组大鼠小肠组织 1∶ 9 加入冷生理盐水制成浓度为 10% 的大鼠肠组织匀浆液参考 NO、NOSMDASOD GSH Px 活性试剂盒说明书操作方法进行相应指标测定

1. 6 统计学方法 数据结果均采用 x珋± s 表示经由统计软件 SPSS 17 0 进行单因素方差分析并行 LSD  t  检验P  0. 05 为差异具有统计学意义

2 结 果

2. 1  各组大鼠生存率比较   假手术组和荔枝核总黄酮假手术组大鼠于实验过程中全部存活脓毒症组术后 7 d  大鼠生存率为 37 5% (6 /16) 荔枝核总黄酮组为 75% (12 /16) 荔枝核总黄酮组大鼠生存率明显高于脓毒症组( P  0 05) 但仍低于假手术组( P  0 05)。

2. 2 各组大鼠血清 CRPIL 6TNF α 水平比较  脓毒症组血清 CRPIL 6TNF α 水平均明显高于假手术组(P 0. 05) ,荔枝核总黄酮组血清 CRPIL 6TNF α 水平均明显低于脓毒症组( P 均  0 05)。见表 1


2. 3 各组大鼠肠组织中 NOS 活力及 NOMDASODGSH  Px 含量比较 脓毒症组大鼠肠组织中 NOMDA 含量和 NOS 活力均明显高于假手术组( P 均  0 05) SOD 和 GSH  Px 含量均明显低于假手术组( P 均  0 05);荔枝核总黄酮组大鼠肠组织中 NOMDA 含量和 NOS 活力均明显低于脓毒症组( P 均  0 05) SOD 和GSH  Px 含量均明显高于脓毒症组(P 均 0. 05);荔枝核总黄酮假手术组各指标与假手术组比较差异均无统计学意义( P 均  0 05)。见表 2


 

3  讨 论

脓毒症的发病机制复杂越来越多的研究发现脓毒症导致的器官损伤与氧化应激密切相关4]感染可以诱导和激 活诱导型一氧化氮合酶( iNOS) 活性增强催化 NO 的产生致血液及组织中 NO 含量显著升高过多的 NO 在组织细胞内蓄积并扩散到临近细胞内导致细胞结构中的多种成分发生过氧化反应细胞功能破坏5从而导致细胞死亡SOD是体内** ROS 的主要抗氧化酶可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害并及时修复受损细胞复原因自由基造成 的细胞损伤MDA 是细胞膜上不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的主要终产物之一其含量可以反映体内氧化应激损 的程度6]GSH Px 是一种过氧化物分解酶可以特异性地催化还原型谷胱甘肽( GSH) 对氢过氧化物的还原反应研究发现GSH  Px 在细胞内能**有害的过氧化物代谢产物阻断脂质过氧化连锁反应从而起到保护细胞膜结构和功 完整性的作用7]

荔枝核是无患子科植物荔枝的成熟种子味甘微苦性温归肝肾经有**散结祛寒止痛之功效研究发现荔枝核中有效成分荔枝核总黄酮可通过**氧自由基调节线粒体功能障碍通过抗脂质过氧化和抗凋亡作用保护肝功能8   10]叶红梅等11]研究发现荔枝核皂苷可以明显提高学习记忆障碍小鼠脑组织中 SOD  GSH  Px 含量降低脑组织中 MDANO 含量和 NOS 活性Yamanishi 等12] 研究发现富含黄酮的荔枝核提取物可以抑制大鼠肝炎细胞模型中 iN- OS 基因 mRNA 和蛋白水平的表达从而减少 IL  1β 诱导的NO还可以抑制 iNOS 基因的转录Zhou 等13发现荔枝核总黄酮可促进小鼠巨噬细胞中 PGE2  NO 的合成且可通过调 COX 的水平和 iNOS mRNA 的表达介导感染后的**过程本研究发现荔枝核总黄酮可以延长脓毒症大鼠的寿命降低血清 CRPIL  TNF  α 水平减轻炎症反应;还可以降低脓毒症大鼠肠组织中 NOMDA 含量和 NOS 活性 提高 SOD  GSH  Px 活性

综上所述荔枝核总黄酮能保护脓毒症肠损伤减轻炎症 反应和氧化应激反应但该组分的进一步细分提纯以及其抗 氧化调控机制还有待进一步研究

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