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北京智鼠多宝生物科技有限责任公司
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鼠尾光照测痛仪的实验

苗药透骨香抗急性痛风性关节炎作用的实验研究

陈应康佘福强刘大腾朱建超刘 燕田培燕

( 黔南民族医学高等专科学校贵州 黔南 558000)


摘要 目的: 考察苗药透骨香**急性痛风性关节炎的作用和可能机理方法: 制备急性痛风性关节炎大鼠模型并分为 5 组分别为模型组阿司匹林( 300 mg / kg) 阳性对照组及透骨香低( 4 g / kg) 中( 8 g / kg) 高( 16 g / kg) 剂量组另设正常对照组所有大鼠连续给药 10  d检测步态评分足跖肿胀体积痛阈踝关节关节液中 K +   DANE5-HT 含量及血清 PGE2 LTB4 含量结果: 与正常对照组比较造模后 10 d 模型组的步态评分足趾肿胀体积及造模后 10 d 踝关节关节液 K + DANE5-HT 含量和血清 PGE LTB 含量显著升高( P  0. 05) 痛阈显著降低(  P   0.  05)  ,提示急性痛风性关节炎模型制备成功与模型组比较透骨香各组步态评分足跖肿胀体积及造模 10 d 踝关节关节液 K + DANE5-HT 含量和血清 PGE LTB  含量不同程度降低痛阈不同程度升高其作用呈剂量依赖性结论:       苗药透骨香具有**急性痛风性关节炎的作用能降低急性痛风性关节炎模型大鼠踝关节关节液 K + DANE5-HT 及血清 PGE LTB 含量

                                                                        关键词 苗药; 透骨香; 急性痛风性关节炎


透骨香是杜鹃花科植物滇白珠 Gaultheria leuco- carpa Bl. var. crenulata( Kurz) T. Z. Hsu 的茎叶四季均可采收味辛性温无毒收载于 1990 年版中国民族**志第二卷1 2003 年版贵州省中药材民族药材质量标准》〔2该药具有**通络  湿和**的功效在**风湿性关节炎跌打损伤和 湿疹方面具有显著的优势3痛风是嘌呤代谢紊 乱及尿酸排泄异常导致血尿酸水平升高的一种疾当尿酸浓度升高极容易形成结晶并沉淀在关节 滑膜与滑膜周围软组织诱发炎症反应这种反应即为急性痛风性关节炎( Acute  Gouty  ArthritisAGA) 临床典型表现为关节红反复发作长久  反复可致关节畸形关节功能障碍影响生活临床 规应用甾体类**药或**类药缓解症状但长 反复使用这类**易导致胃肠道不佳反应且易 因此如何缓解并**急性痛风性关节炎是目 前临床棘手的问题本研究考察了透骨香对急性痛 性关节炎的疗效及其可能机理为苗药透骨香的 临床应用提供实验依据

1 材料与方法

1. 1 实验动物 SPF SD 大鼠体质量 180 220 g购自贵阳医学院实验动物中心实验动物生产许可证号: SCXK( 黔) 2002-0001进行试验前在实验室适应性饲养 1  w自由饮水摄食

1. 2 **与试剂  透骨香购自遵义市中药材市经黔南民族医学高等专科学校魏学军副教授鉴定为杜鹃花科植物滇白珠 Gaultheria  leucocarpaBl. var. crenulata( Kurz) T. Z. Hsu 的干燥茎叶 60℃ 干燥致恒重的透骨香药材 1  kg置于不锈钢桶中加入没过药材的米醋浸润至透约 1. 0  h再移至炒锅明火翻炒至药材表面有焦斑再加 5 倍量水大火煮沸小火维持微沸状态 30  min滤液后再煎 1次2 次煎液混合浓缩至生药浓度 1  g / mL用时稀释至所需浓度; 阿司匹林肠溶片批号: 150411江苏平光制药有限责任公司; 尿酸晶体美国 Sigma 公司; 生理盐水注射液华仁药业有限公司; 多巴胺( DopamineDA ) 去甲肾上腺素 (  Norepinephrine NE) 5-羟色胺( 5-hydroxytryptamine5-HT) 前列腺素 E2 ( ProstaglandinE2 PGE2 ) 白三烯( LeukotrienesB4LTB4 ) 试剂盒均购自武汉博士徳生物工程有限公司

1. 3 主要仪器  N4 紫外可见分光光度计上海仪电分析仪器有限公司; DB027 型鼠尾光照测痛仪北京智鼠多宝生物科技有限责任公司

2 方法

2. 1   动物造模分组及给药    参考文献方法4将大鼠固定暴露右侧踝关节碘伏**在大鼠右侧踝关节背侧以 45° 插至胫跗关节腔并注射 0. 1 mL 50 mg / mL 的尿酸钠即制成急性痛风性关节炎大鼠模型将急性痛风性关节炎大鼠按体质量随机分为  5 组分别为模型组阿司匹林( 300 mg / kg) 阳性对照组及透骨香低( 4 g / kg) 、中( 8 g / kg) 、高( 16 g /kg) 剂量组另设正常对照组同部位注射生理盐水注射液 0. 1 mL每组 10 只各组灌胃相应**正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水给药体积 10  mL / kg1 次/ d连续给药 10  d

2. 2 指标检测

2. 2. 1 步态评分 分别于给药 1510 d 给药后 30 min 对各组大鼠步态进行评分分为 4 个级别 ( 0 分) : 行走正常Ⅰ级( 2 分) : 轻微跛行右下肢略有弯曲; Ⅱ级( 4 分) : 中度跛行右下肢刚触及地面; Ⅲ级( 6 分) : 重度跛行右下肢不能触及地面三足行走

2. 2. 2 足趾肿胀体积: 分别测量给药 1510 d 给药后 50 min 大鼠踝关节的体积自制足趾肿胀体积检测器取三路活塞分别命名 ABC 三端A 端联通 5  mL 注射器B 端联通 5  mL 倒置管相连C 端链接溶液导管 C 端关闭打开 A B 端将待测大鼠右后肢踝关节浸入倒置管使水面平行于倒置管取出大鼠再打开 A 端注满倒置管记录 A 端注入倒置管的水体积即为待测大鼠踝关节体积

2. 2. 3 痛阈: 分别于 1510 d 给药后 40 min 记录

动物痛阈方法如下: 20 ℃ 的安静环境下采用DB027 型鼠尾光照测痛仪固定辐射热灯固定大鼠使双后肢暴露在灯下距离灯约 3 cm 处照射记录从照射到大鼠出现热痛缩腿反应的时间即为痛阈时间

2. 2. 4 踝关节关节液中 K + 浓度: 给药 10  d末次给药 1 h 后处死大鼠取右下肢的踝关节 0. 2 g 置于 1 mL 生理盐水 4 ℃ 浸泡过夜10 000 r / mim 离心 10  min取上清 0. 2  mL采用比色法检测计算踝关节关节液中 K + 浓度

K + 浓度( mmol / L)  = 待测管光密度 × 标准浓度

2. 2. 5 踝关节关节液中 DANE  5-HT 含量: 处死大鼠取右下肢的踝关节滑膜组织约 500  mg严格按试剂盒的要求操作检测踝关节关节液中 DANE5-HT 含量

2. 2. 6 大鼠血清 PGE2  LTB4 含量: 处死大鼠腹主动脉取血离心得血清按照说明书步骤操作以ELISA 法检测血清中 PGE2  LTB4 含量

2. 3  统计学处理    SPSS 19. 0 软件对数据进行统计处理其中计量资料以 x珋± s 表示采用方差分析; 计数资料采用卡方检验设置 α = 0. 05 为检测水平 P  0. 05 为差异有统计学意义

3 结果

3. 1 透骨香对急性痛风性关节炎大鼠步态评分 影响结果如表 1 所示与正常对照组比较造模后第 1510 天模型组步态评分显著升高( P  0. 05) 与模型组比较透骨香中高剂量组大鼠步态评分在 造模后第 1510  天低剂量组在第 10  天显著降低( P  0. 05) 且其作用呈剂量依赖性



3. 2     透骨香对急性痛风性关节炎大鼠足跖肿胀的影响    结果如表 2 所示与正常对照组比较造模后 1510 天模型组足跖体积显著升高( P 0. 05) 。与模型组比较透骨香中高剂量组大鼠足跖关节体积在造模后第 1510 天显著降低( P 0. 05) ,且其作用呈剂量依赖性



3. 3 透骨香对急性痛风性关节炎大鼠痛阈的影响结果如表 3 所示与正常对照组比较造模后第1510 天模型组大鼠痛阈显著降低( P  0. 05) 。与模型组比较透骨香低剂量组在造模后第 510 天高剂量组大鼠在造模后第 1510 天痛阈显著升 ( P 0. 05) ,且其作用呈剂量依赖性



3. 4 透骨香对急性痛风性关节炎大鼠踝关节关节液 K + 、DA、NE、5-HT 含量的影响 结果如表 4 所示,与正常对照组比较,模型组大鼠踝关节关节液 K + 、DA、NE 5-HT 含量显著升高( P 0. 05) 。与模型组比较,透骨香高剂量组大鼠踝关节关节液  K + 、DA、NE 5-HT 含量均显著降低( P 0. 05 ) , 且其作用呈剂量依赖性



3. 5 透骨香对急性痛风性关节炎大鼠血 PGE2 LTB4 含量的影 结果如 5 与正常对照模型组大鼠血 PGE2 LTB4 含量显著升P 0. 05) 模型组比透骨香各剂量组大鼠PGE2 LTB4 含量显著降低( P 0. 05) 且其作用呈剂量依赖性

1 讨论

我国苗族白族和彝族等少数民族均有应用透骨草的经验该药在**肌肉酸痛风湿病腰椎骨质增生踝扭伤和风湿痹痛等方面具有显著功〔3,4〕

  本课题结果显示苗药透骨香具有**急性痛风性关节炎的作用表现为改善急性痛风性关节炎大鼠的步态评分和足跖肿胀体积其机理可能与降低踝关节关节液 K + DANE5-HT 及血清 PGE 和LTB4 含量有关透骨香**急性痛风性关节炎的作用可能与透骨香的化学成分有关5-7: 1) 透骨香的有效成分之一为水杨酸甲酯与阿司匹林的结构母核一致因此具有阿司匹林等非甾体**类**的药效特征周晓霞水杨酸甲酯含量约 0. 26% 折算至本课题中透骨香组的水杨酸甲酯摄入量约 10  40  mg / kg从摩尔数看远低于阳**因此透骨香虽然具有非甾体**药的特征 但用药量较小因此可以减少这类**的胃肠道不 良反应2) 本课题结果显示虽然透骨香所含的水杨酸甲酯水平较低但其高剂量**急性痛风性关 节炎的效果与阳**相当甚至在提高痛阈方面还 优于阳**组可见还有其他成分的效应透骨香 的另外一种有效成分是儿茶素动物试验显示儿茶 25  100 μg / mL 可显著改善类风湿性关节炎大鼠关节局部肿痛和多发性关节炎和病理形态变化 因儿茶素可抑制滑膜细胞分泌的炎症因子 IL-1TNF-α 和 PGE2 上调胞内 cAMP 水平cAMP 可抑制滑膜细胞增殖减轻类风湿性关节炎的症状3) 动物试验显示以透骨香提取的挥发油制成的微乳对热板法扭体法和二甲苯致耳廓肿胀等方法制备的炎症模型小鼠均有镇痛**作用

  关于本课题中透骨香采用醋制的原因在于89显示通过醋制清炒盐制生品和酒制等方法炮制透骨香醋制法得到的水杨酸甲酯苷含量*因此选择醋制给药但挥发油也是透骨香的重 要有效成分经醋制会损失部分挥发油和儿茶素可见炮制方法可影响透骨香的药效发挥因此本课 题下一步的研究方向在于考察炮制方法对于透骨香 在**急性痛风性关节炎的意义

  综上所述苗药透骨香具有**急性痛风性关节炎的作用降低踝关节关节液 K + DANE5-HT 及血清 PGE2 LTB4 含量
















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