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北京智鼠多宝生物科技有限责任公司
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加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

山东医药 2016 年第 56 卷第 41

加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

刘晓婷1陈维达3 陈泽涛3 王海涛2

( 1 山东中医药大学济南 250014; 2 潍坊市中医院; 3 山东省中医院)

 

摘要: 目的     探讨加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响方法     选取 SPF 级雄性 SD 大 90 只分为假手术组模型组中药高剂量组中药低剂量组西药组 5  组每组大鼠 16  只采用可逆性大鼠脑中动脉闭塞线栓法进行右侧大脑中动脉栓塞( MCAO) ,于造模成功后 24 h 假手术组与模型组灌胃生理盐水中药高剂量组中药低剂量组分别灌胃加味涤痰汤 1 920 96  g / ( kg·d) 西药组灌胃吡拉西坦片 0 5  g / ( kg·d) 灌胃容积为 10  mL / kg; 1 次/ d连续给药 7  d各组于**开始前及**结束 24  h 内进行神经行为学测试并记录于给药周期结束 24 h 内取脑组织切片染色拍照计算各组梗死体积比及缺血侧大脑水肿度结果 **后神经障碍评分及平衡木行走实验得分中药高剂量组西药组与模型组比较明显减低( P 均  0 05) 中药低剂量组*为显著P  0 01) ; 中药高剂量组中药低剂量组西药组较模型组自发活动次数明显增多( P 均  0 05) 中药高剂量组*为显著( P  0 01) 中药低剂量组及西药组亦明显增多( P  均  0 05 ) 中药高低剂量组与西药组比较P  均 0 05; 中药高剂量组中药低剂量组西药组与模型组脑梗死体积相比均明显降低( P 均  0 01) ; 中药低剂量组西药组缺血侧大脑水肿度明显降低( P 均  0 01) 结论     加味涤痰汤灌胃对缺血再灌注损伤大鼠神经功能有保护作用能提高受累肢体肌力恢复精巧运动减少脑梗死体积

关键词: 脑缺血再灌注损伤; 加味涤痰汤; 中药; 神经保护; 大鼠

doi: 10. 3969 / j. issn. 1002-266X. 2016. 41. 010

中图分类号: 651 1 文献标志码: A 文章编号: 1002-266X( 2016) 41-0036-03

缺血性脑卒中是脑血管病中*常见的一种类型约占全部脑血管病的 80% 脑缺血一定时间恢复血液供应后其功能不但未能恢复却出现了更加 严重的脑功能障碍称为脑缺血再灌注( CIR) 损伤1缺血再灌注损伤是缺血性脑卒中导致神经功能障碍的主要病理基础缺血性脑卒中属于中医 “中风”范畴出自济生方的涤痰汤有涤痰开窍之功是**急性期缺血性脑卒中的有效方剂2015  2016  1 月我们探讨了加味涤痰汤灌胃 CI 损伤大鼠神经功能的影响

1 材料与方法

1 1 材料 雄性 SD  大鼠 90  只SPF  级体质 140  160  g北京维通利华实验动物技术有限公司提供许可证号 SCXK( 京) 2012-0001质量合格证号 NO 011400700055671235-氯化三苯基四氮唑( TTC) 购于国药集团化学试剂有限公司; 苏木色精  Y甲苯胺蓝等试剂均为分析纯购于国药集团化学试剂有限公司实验仪器系统冠状切脑 型号 68709深圳瑞沃德公司; LEICA  M2245  切片机LEICA  HI1220  烤片机LEICA  XL  全自动染色机OLYMPUS  BX51  生物显微镜; FED53  恒温干燥箱购自德国 Binder 公司; LEICA ASP200s 全自动全封闭脱水机LEICAEG1150H 包埋机; 电热恒温鼓风干燥箱购自上海培因公司; 自发活动视频分析系统和大小鼠抓力测定仪购自北京智鼠多宝生物科技有限责任公司中药加味涤痰汤( 胆南星 12 g石菖蒲橘红栀子枳实各 10  g半夏 9  g水蛭生大黄各 6 g) ,采用北京康仁堂药业全成分中药配方颗粒每剂 9 6  g西药吡拉西坦片( 0 4  g / 片) 购自山东仁和堂药业有限公司

1 2    CI 损伤模型建立与分组    以 10% 水合氯醛按 3 5  mL / kg 麻醉大鼠按照 Clark  等2的方法采用可逆性大鼠脑中动脉闭塞线栓法进行右侧大脑中动脉栓塞( MCAO) 手术缝合皮肤切口并**假手术组除不插入线栓外过程相同缺血 90 min 后拔出栓线进行再灌注3再灌注 90  min 时进行神经功能障碍评分参照 Longa 等4 制定的标准进行评分神经功能评分为1  3 分的MCAO 大鼠和0 分的假手术大鼠为本实验选用实验共分为 5 组: 假手术组模型组中药高剂量组中药低剂量组西药组假手术组选用分的假手术大鼠 16 只其余 4 组随机选取造模成功大鼠各 16 只; 假手术组与模型组灌胃生理盐水中药高低剂量组分别灌胃加味涤痰汤 1 920 96  g / ( kg·d) 西药组灌胃吡拉西坦片 0 5  g / ( kg·d) 灌胃容积为 10  mL / kg; 于造模成功后24 h 给药1 次/ d连续给药7 d固体饲料和水自由摄取

1 3    神经行为学测试    各组于**开始前及**结束 24 h 内进行神经行为学测试并记录①神经功能障碍评分: 参照 Longa 等4 制定的标准进行评分②平衡木行走实验5: 测定大鼠运动整合及协调能力术前周每天早晚各训练 1 次每次 10 min使其能顺利在平横木上行走平衡木长 80 cm宽 2 5  cm平放在距离地面高 10  cm 处参考 Feeney 的计分标准③自发活动次数和抓力: 将每只大鼠单独置于暗室之中采用自发活动视频分析 系统记录 10  min 中内的自发活动次数并用抓力测定仪对大鼠逐一进行抓力测试术前 1 周每天早晚各训练 1 次使大鼠适应暗室及对抓力板抓握④ 脑梗死体积比和缺血侧大脑水肿度: 各组给药周期结束 24  h 内进行神经行为学测试后将大鼠断头取脑取用的脑组织置于冰浴中迅速切片切片厚度 3 mm37  ℃ 避光 TTC 染色约 30  min取出脑片拍照用 Image-Pro Plus 6 0 软件处理图片计算各组梗死体积比 同时计算缺血侧大脑水肿度

1 4    统计学方法    采用 SPSS17 0 统计软件计量资料以 x± s 表示多组间比较采用单因素方差分析多个样本均数间的两两比较采用 LSD 法P 0. 05 为差异有统计学意义。

2 1    各组**前后神经功能障碍评分平衡木行走实验得分比较 见表 1


 

2 2 各组**前后自发活动次数和抓力测量结果比较 见表 2

2 3 各组**后脑梗死体积比和缺血侧大脑水肿度比较 见表 3

 

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中医认为中风的发生与“风虚”密切相关其中痰是人体水液代谢失常而形成的病理产物是中风发生过程中重要的致病因素并能影响**的发展转归现代研究表明CI 损伤是一个多环节多级联的病理生理过程与自由基的过度形成神经细胞内钙离子超载兴奋性氨基酸的细胞毒作用炎性反应和细胞凋亡等多种机制相关。

前研究应用的神经保护剂多是针对 CI 损伤中的某一个环节起效7但由于 CI  损伤机制的复杂性可能使用任何阻断单一环节的**疗效不佳中药复方具有化学成分多样性生物活性广泛性的 特性在阻断 CI 损伤发**展中可从多靶点多层次多环节发挥作用

涤痰汤主治“中风痰迷心窍舌强不能言”临床对急性缺血性脑卒中的**有确切疗效8 研究采用加味涤痰汤方中半夏燥湿化痰胆南星祛 风痰而止痉共为君药; 橘红化痰**枳实主降气行痰湿石菖蒲祛痰开窍; 栀子清热泻火大黄泻热通便水蛭**逐瘀通络; 诸药合用具有豁痰开窍醒神通络的功效本研究发现中药高低剂量组西药组大鼠在用药周期结束后神经功能障碍评分平衡木行走实验得分10  min 内自发活动次数及抓力均较模型组有所改善表明涤痰汤无论高低剂量  均能有效改善 MCAO 大鼠神经功能提高受累肢体肌力恢复受累肢体精巧运动功能从**应用剂 量上看中药高低剂量组均有明显神经保护作用 两组比较差异无统计学意义无明显的量效关系

中药高低剂量组及西药组均能有效减少脑梗死体积中药低剂量组西药组缺血侧大脑水肿度明显降低但中药高剂量组脑水肿度未见明显降低这与神经行为学指标的改善并不完全一致实验中往往以脑梗死体积的变化作为评估干预**药效的优选标准但亦常会有脑缺血模型动物的行为变化与脑组织病理改变间难以找到相关的联系9可能与坏死周围水肿区神经细胞功能未完全丧失有关

本研究证实加味涤痰汤灌胃对 CI 损伤大鼠神经功能有保护作用能提高受累肢体肌力恢复精巧运动减少脑梗死体积

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