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北京智鼠多宝生物科技有限责任公司
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中国人民解放军第215 医院辽宁大连固定器

束缚应激模型大鼠体重及生化指标含量变化

应激是机体受到各种内外环境因素及社会心理因素刺激引起的一系列全身性非特异综合性应答反应表现为下丘脑 垂体 肾上腺皮质轴( HPA) 系统及交感神经 肾上腺髓质系统的兴奋并伴有众多组织和器官的功能变化1应激动物模型的建立是研究应激的基础慢性束缚应激动物模型已被证明是一种能引起典型非特异应激表现的有效方法其可以通过剥夺动物活动自由而产生纯粹的挫 折应激这种应激造成模型动物心理紧张状态倾向  于通过非特异性的心理和生理反应表现出来应激 时众多神经***功能发生变化从而造成**功 能低下而且束缚应激能抑制动物体重增加2 3 相似同时又适应应激领域由急性转入慢性的发展趋势被泛用于抑郁症的相关研究

本实验模拟慢性束缚应激过程观察大鼠慢性 束缚应激不同时间体重及血清中皮质酮( CORT)  , 去甲肾上腺素 ( NE) ,热休克蛋白 70 ( HSP70) 、白介素 2 ( IL  2) 和白介素 4 ( IL  4) 的变化探讨慢性束缚应激不同时间对动物体重**功能及神经 递质的影响为心理应激功能研究提供实验依据和 理论基础

1 材料和方法

1 1 实验对象与试剂

雄性清洁级  Wistar  大鼠 30  只6  周龄体重  ( 90 ± 3) g 购于大连医科大学SPF 动物实验中心合格证编号:  SYXK (  辽)  2008   0002 ;  CORTNE

HSP70IL  IL  4 酶联**检测试剂盒购于Abcam 公司; 其他试剂均为国产分析纯; 酶标仪为Thermol 公司产品; 固定器为北京智鼠多宝生物科技有限公司产品

1 2    动物分组

大鼠适应环境 7 d 后随机分为 3 组: 正常对照组( C) 、束缚 3 周组( R3) 和束缚 5 周组( R5) ,每笼5 只饲养于清洁级动物房室内温度保持为( 22 ±2) ℃ 相对湿度保持为 30% 40% 各组大鼠常规饲料自由进食饮水并每日触摸动物以适应实验人员的操作

1 3    处理方法

除正常对照组外每天早 9: 00 将大鼠置于不能自由活动的固定器内连续束缚 6  h1 次/ d连续束 3 周或 5 周束缚时 3 组大鼠均禁食禁水应激大鼠不受挤压无损伤不影响呼吸和排泄但运动受限首先对 R5 组大鼠进行束缚2 周后对 R3 组大鼠进行束缚

1 4    体重称量

大鼠称重均在早上进行所有大鼠在束缚前 1 天和束缚结束后第 2 天均进行 1 次体重测量

1 5    生化指标测定

各组大鼠在束缚应激结束后第 2 天眼球静脉采血 2  mL室温静置 2  h待血液凝固后于 4℃  3000 r / min 离心 20  min分离血清并置于  80  ℃ 保存待测采用 ELISA 法检测 CORTNEHSP70IL  2 和IL  4 的含量测定时所有样品用生理盐水稀释 10 倍具体操作过程严格按试剂盒说明书进行

1. 6 统计学方法

SPSS11 5 统计软件对实验数据进行统计分析结果用均数 ± 标准差( x ± s) 表示差异检验用方差分析和 t 检验P  0 05 表示差异有统计学意义

2 结 果

2. 1 行为变化

随着束缚时间的延长大鼠发生明显的行为变化 C 组比较束缚组大鼠进食量减少行为迟缓长期站立不动尖叫不断的淌泪皮毛和面部不洁毛须竖立目光呆滞

2. 2 体重变化

慢性束缚应激显著抑制大鼠体重增加 C 组相比R3 组和 R5 组大鼠分别显著降低了 29 94%和 33 23% ( P  0 05) 且随着束缚时间延长大鼠体重抑制越明显R5 组大鼠比R3 组降低了14 57% ( P  0 05) 见表 1



2 3 生化指标变化

慢性束缚应激可使大鼠血清 CORT 含量升高 与 C 组相比R3 组和 R5 组分别升高了 11 25% 和46 65% ( P  0 05) 且具有时间依赖性随着束缚时间延长含量升高越明显R5  组含量比 R3  组升高了 31 82% ( P  0 05) 慢性束缚应激后R3 组和 R5 组 NE 含量比 C组分别显著升高了 25 16%  和 39 09% ( P  0 05) 且具有时间依赖性着束缚时间延长升高越明显R5 组比 R3 组升高了11 13% ( P  0 05) 

R3 组和 R5 组与 C 组相比 HSP70 含量分别升高了 5 15% ( P  0 05)  和13 49% ( P  0 05 ) R5组含量比 R3 组升高了 7 93% ( P  0 05)  C R3 R5 组 IL  2含量分别降低了 15 43% 和 16 01( P 0 05) 但不具有时间依赖性随着束缚时间延长其含量并没有明显降低慢性束缚应激后大鼠血清中 IL 4 含量升高R3 组和 R5  组分别升高了9 86% 和 18 69% ( P 0 05) 且具有时间依赖性R5  组比 R3  组升高了8 04% ( P  0 05) 见表 2


应激抑制大鼠体重增长的原因可能归结于皮质酮( COPT) 升高皮质酮可以增加机体对胰岛素的敏感性减少食物的摄入量而导致体重减轻而且皮质酮还可促进蛋白质分解抑制其合成同时也影响糖类和脂类的代谢这些*终导致体重增长缓慢4本研究在束缚过程中发现束缚组大鼠进食量减少根据行为变化和体重变化初步确定造模成功

本研究中束缚应激导致了大鼠血清 CORT 升高且束缚时间越长对大鼠损害越明显因为应激主要激活 HPA 轴老鼠受到束缚后由于激怒使得交感神经兴奋下丘脑分泌的促肾上腺皮质**释放因子( CRH) 经垂体门脉系统进入垂体前叶促使促肾上腺皮质**( ACTH) 产生此**作用于肾上腺皮质使之分泌大量的糖皮质**( GC皮质醇和皮质酮) ,*终发挥生物学作用 GC 的分泌反过来又抑制 ACTH CRH 的释放形成负反馈机制而且 GC 水平升高导致海马神经元内糖皮质**受体( GR) 受损密度下降进而 HPA  轴脱抑[5 8]NE 是由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺** 属于一种单胺类神经递质单胺类神经递质是一类 调节机体生理活动的重要物质许多实验证明单胺  类神经递质在应激状态下有所改变还有研究表明 大鼠抑郁样行为可能与 NE 含量升高对色氨酸代谢影响有关9CORT 和NE 是研究的比较多的指标 本研究结果与前期报道一致

目前普遍认为外周血清 HSP70 能体现机体的应激程度慢性束缚引起大鼠血清 HSP70 浓度显著升高提示慢性束缚对机体是损伤性因素10热休 克蛋白 HSP70 是一种进化上高度保守的应激蛋白 细胞内 HSP70 主要参与细胞内蛋白质的折叠装配降解和修复过程调节蛋白活性介导蛋白转运 和维护蛋白的自稳系统等正常情况下大多数组织 细胞内其含量很低当机体遭受各种生理病理或心 理应激时表达会明显增加11运动应激能够诱导机体 HSP70 生成HSP70 的适度增加可增强机体的适应能力从而成为一种保护机制HSP70 具有抗氧化的生物活性对应激有较强的抵抗作用12 13本研究中小鼠束缚 5 周后HSP70 明显升高

IL 2 主要由活化的 T **细胞产生能维持 T **细胞在体外的生长并激活多种**细胞还可以活化 NK 细胞B **细胞分泌抗体是调节机体**功能*主要的细胞因子之一其水平反映了 T 细胞的功能状态14 15本研究中慢性束缚降低了大鼠血清 IL 2 含量说明束缚应激使大鼠的**功能受到抑制与前期报道一致14 16

IL 4 具有调节**应答急性期反应并参与机体炎症反应的抗感染防御作用同时具有激活HPA 轴的作用而且许多研究报道束缚应激能使HPA 轴功能亢进17但关于束缚应激与IL 4关系的研究鲜有报道本研究中慢性束缚后大鼠血清IL 4 含量升高

本实验结果表明: 慢性束缚应激可抑制大鼠体重增长改变血清中 CORTNEHSP70IL 2 和IL 4的含量可成为重要的分子靶标为各种相关心身性**的防御和**提供分子生物学基础和实验依据


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